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                      薄層色譜TLC具體操作步驟

                      更新時(shí)間:2017-02-21      點(diǎn)擊次數(shù):2959
                      薄層色譜TLC是將吸附劑、載體或其他活性物質(zhì)均勻涂鋪在平面板(如玻璃板、塑料片、金屬片等)上,形成薄層(常用厚度為0.25毫米左右)后,在此薄層上進(jìn)行層析分離的分析方法。
                      分析程序 將樣品溶液用毛細(xì)管點(diǎn)在薄層板的一端,置密閉槽中,加入適宜溶劑為流動(dòng)相。由于毛細(xì)管作用,溶劑被吸上,沿板移動(dòng),并帶動(dòng)樣品中各組分向前移動(dòng),這個(gè)過程稱為展開。由于各組分性質(zhì)不同,移動(dòng)距離不同,展開一定距離后,即得互相分離的組分斑點(diǎn)。可用適當(dāng)方法使各組分在板上顯示其位置,如組分本身有顏色,即可直接觀察,否則可噴顯色試劑或在紫外燈下觀察熒光等辦法確定斑點(diǎn)位置。

                      薄層色譜TLC操作
                      ⑴制板(以硅膠板為例)
                      選擇合適的玻璃板(經(jīng)常使用顯微鏡上的載玻片),依次用水和乙醇洗凈,晾干。取適量薄層色譜用的硅膠,加適量蒸餾水調(diào)成糊。調(diào)制時(shí)慢慢攪拌,勿使產(chǎn)生氣泡。將糊倒在玻璃板上,搖動(dòng)攤平,晾干。使用前放入烘箱內(nèi),在105-115oC左右烘干40-50分鐘。冷卻后使用。
                      ⑵點(diǎn)樣
                      將試樣用zui少量展開劑溶解,用毛細(xì)管蘸取試樣溶液,在薄層板上點(diǎn)樣。在樣點(diǎn)上輕輕畫出一條平行于玻璃板底邊的細(xì)線。薄層色譜板載樣量有限,勿使點(diǎn)樣量過多。
                      ⑶展開
                      吹干樣點(diǎn),豎直放入盛有展開劑的有蓋展開瓶中。展開劑要接觸到吸附劑下沿,但切勿接觸到樣點(diǎn)。蓋上蓋子,展開。待展開劑上行到一定高度(由試驗(yàn)確定適當(dāng)?shù)恼归_高度),取出薄層板,再畫出展開劑的前沿線。
                      ⑷顯色,計(jì)算Rf值
                      揮發(fā)干展開劑,選擇合適的顯色方法顯色。量出展開劑和各組分的移動(dòng)距離,計(jì)算各組分的相對(duì)移動(dòng)值。
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